ELISA - Enzymaticky Vázaný Imunosorbentový Test: Transkript

2023 Autor: Riley Dean | [email protected]. Naposledy změněno: 2023-05-24 12:07

Diagnostická metoda (ELISA) je informativní a není příliš nákladná, proto mnoho laboratoří nabízí svým klientům tuto metodu (enzymově vázaný imunosorbentový test). Studie se provádí na prázdném žaludku, krev pro analýzu se odebírá z pacientovy kubitální žíly. Před testem ELISA je vhodné nekuřit nebo pít alkohol.

Obsah článku:

• 1 Co je krevní test ELISA
• 2 Co jsou to imunoglobuliny
• 3 Jak se provádí krevní ELISA
• 4 Imunoanalýza proti parazitům metodou ELISA
• 5 Jak se ELISA používá
• 6 Testy pro imunologickou analýzu krve pomocí ELISA
• 7 Rozsah imunologické analýzy krve pomocí ELISA
• 8 Indikace pro použití a detekci nemocí pomocí ELISA
• 9 Výhody metody ELISA
• 10 Nevýhody metody ELISA
• 11 Možné výsledky ELISA

Co je krevní test ELISA

Mezi metodami analýzy krve, které umožňují posoudit schopnost těla odolávat infekčním onemocněním a ukazovat fázi onemocnění, zaujímá důležité místo enzymatický imunosorbentový test (ELISA). Provedení této studie umožňuje komplexně posoudit aktivitu ochranné funkce krve a identifikovat stav imunodeficience u infekčních patologií, stejně jako onemocnění krve, autoimunitní procesy, hormonální problémy.

Toto je laboratorní studie, která vám umožní určit přítomnost specifických protilátek (ochranné faktory krve proteinové povahy) na určité antigeny (patogenní původci). Z protilátek mají prvořadý význam imunoglobuliny, které mohou existovat ve formě imunokomplexů.

Imunoglobuliny jsou produkovány jako výsledek komplexních neurohumorálních reakcí lidské imunity, které vznikají jako reakce na zavedení cizích antigenů. Pro každý typ patogenního činidla jsou produkovány jeho vlastní specifické protilátky. Působí "vazbou" antigenu nebo patologického mikroorganismu, vytvářením komplexní sloučeniny "antigen-protilátka" s následnou neutralizací, enzymatickou lýzou, fagocytózovými reakcemi a stahováním z těla. Metoda ELISA určuje přítomnost určitých komplexů typu patogenu nebo škodlivé látky přítomné u pacienta.

Vzhledem k nízké ceně a použití krve jako biomateriálu se metoda používá jako screeningová metoda. Například, je-li podezření na parazitózu, pacienti darují krev, aby stanovili protilátky na škrkavky, lamblie atd. Pokud je výsledek pozitivní, neměli byste okamžitě začít léčit parazity - musíte porovnat klinický obraz, výsledky testu ELISA a případně výsledky dalších vyšetřovacích metod.

Je třeba si uvědomit, že po dokončení léčby mohou protilátky zůstat v našem těle po velmi dlouhou dobu, dokonce i poté, co infekce opustila naše tělo, tj. tak zvaná „sérologická jizva“zůstává. Například na noční obloze jsou tisíce hvězd. Mnoho z těchto hvězd už dávno zemřelo, ale jejich světlo svítilo dodnes, po staletí. Ve skutečnosti vidíme pouze hvězdnou stezku. Světlo je, ale hvězda je už dávno pryč.

Pokud ale není světlo, neznamená to, že tam hvězda nebyla. S protilátkami je to stejné. Jejich přítomnost nezaručuje přítomnost požadovaného infekčního agens v těle. Nepřítomnost protilátek neznamená, že nedochází k žádné infekci. Pokud je výsledek analýzy pomocí ELISA pozitivní, znamená to, že musíte hledat infekci konkrétnějšími a dražšími metodami - PCR, bakteriologické kultury. Falešně pozitivní výsledek je možný, pokud několik mikroorganismů má podobnou antigenní strukturu, a pak se „podobné“protilátky vytvoří k různým mikrobům.

Co jsou to imunoglobuliny

Bylo objeveno a studováno 5 hlavních tříd imunoglobulinů - IgA, IgM, IgG, IgD, IgE. role ostatních dosud nebyla zcela objasněna a je ve fázi vědeckého výzkumu.

Hlavním úkolem imunoglobulinu A (IgA) jsou ochranné funkce sliznic dýchacích cest, gastrointestinálního traktu a močových cest. Při akutním nástupu nemoci je nelze identifikovat. Tyto ochranné komplexy se objevují až od 2 týdnů od počátku nemoci, někdy později. Převážná část imunoglobulinu A je koncentrována ve sliznicích. Přibližně 80%. Zbytek protilátek cirkuluje v krvi.

Hlavní funkcí je neutralizace a ničení mikroorganismů. Po odeznění akutních projevů nemoci se množství těchto imunoglobulinů začne snižovat a úplně mizí až 8 týdnů po nástupu nemoci. Pokud je IgA detekován později, pak to znamená chronizaci procesu.

Hlavními a prvními markery akutní fáze vyvíjející se patologie jsou imunoglobuliny třídy M (IgM). Nacházejí se do 5. dne od začátku malátnosti. Jejich přítomnost v krvi může být stanovena po dobu asi 6 týdnů. Pak začnou rychle mizet.

Zbytková imunitní odpověď je charakterizována přítomností imunoglobulinů třídy G (IgG) v krvi. Výskyt těchto faktorů v krvi je detekován asi měsíc po nástupu onemocnění. V budoucnu je lze určit po mnoho měsíců, let a dokonce po celý život, vykonávat ochrannou funkci proti návratu (recidivě) nemoci a v některých případech znemožnit sekundární vývoj patologie.

Pokud se množství imunoglobulinu G začne opět zvyšovat, lze předpokládat opakovanou infekci. K podobnému závěru lze dospět provedením dvou nebo tří testů provedených v intervalu 2 týdnů.

Při parazitologii se používá imunoglobulin E (IgE), který se nachází na B-lymfocytech a nachází se u zdravých lidí v nízkých koncentracích. Po 10 letech života dosáhne svých maximálních hodnot. Množství imunoglobulinu D se zvyšuje během těhotenství u pacientů se systémovými onemocněními pojivové tkáně, bronchiálním astmatem a onemocněními způsobenými stavem imunodeficience.

Jak se provádí krevní ELISA?

Pro enzymatický imunotest se ve většině případů používá krev pacientů, někdy se odebírá sklovitá tkáň, tekutina páteřního kanálu a plodová voda.

Krev je odebírána injekční jehlou do stříkačky z kubitální žíly. Studie se provádí na lačný žaludek. Je třeba si uvědomit, že užívání některých léků může ovlivnit výsledek testu. Před darováním krve se musíte vyhnout kouření, pití alkoholu. Příjem omamných látek může výsledky zkreslit.

V případě negativních hodnot imunoglobulinů IgM, IgG, IgA můžeme hovořit o nepřítomnosti nemoci nebo její počáteční fázi a výsledek s minusy je možný s úplným zotavením po značném čase.

Pokud IgA a IgM nejsou detekovány a IgG se projevuje pozitivně, pak s největší pravděpodobností mluvíme o vytvořené imunitě po infekčním onemocnění nebo po očkování.

Pokud IgA a IgM nejsou detekovány a IgG se projevuje pozitivně, pak s největší pravděpodobností mluvíme o vytvořené imunitě po infekčním onemocnění nebo po očkování

V případě vysokého titru IgM se zápornými hodnotami IgG, IgA lze dojít k závěru, že existuje akutní infekční onemocnění.

Současné pozitivní hodnoty výsledků imunoglobulinů - IgA, IgM, IgG jsou charakteristické pro akutní fázi recidivy existujícího chronického onemocnění.

U chronické infekce ve fázi retence procesu (remise) vykazuje ELISA negativní hodnoty imunoglobulinu M (IgM), zatímco výsledek imunoglobulinů G (IgG) a A (IgA) bude pozitivní.

Imunoassay pro parazity pomocí ELISA

ELISA je zkratka pro enzymaticky vázaný imunosorbentní test na parazity. Znamená to lékařské testování imunitního systému člověka. Test je založen na schopnosti protilátek změnit barvu. Tato diagnostická metoda má mnoho pozitivních rysů. Například dokáže detekovat obrovské množství nemocí způsobených infekcí. Je nejúčinnější v případech onemocnění způsobených parazitickými organismy.

Co předkládaná technologie dává: stanovení přítomnosti hlíst v krvi; hledání dalších patogenů v těle; můžete zjistit důvody zhoršení vašeho zdraví; ošetření je také založeno na analýzách získaných tímto způsobem; můžete sledovat zdraví imunitního systému.

Dalším dobrým rysem je schopnost sledovat markery rakoviny, bez ohledu na jejich původ, ale samozřejmě podléhající jejich přítomnosti v těle. Tento test je také vhodný pro popis stavu lidského reprodukčního systému. Přítomnost určitých bílkovin, hormonů a peptidů umožňuje posoudit potenciál partnera z hlediska početí dítěte a předpokládané kvality budoucího plodu.

Krevní test na Giardii je u moderních lékařů poměrně populární praxí. Kromě toho je tato výzkumná metoda vynikajícím nástrojem pro biomedicínskou analytiku a kvantitativní statistiku, pokud jde o specifické antigeny.

Jak se používá metoda ELISA?

Bylo by velkou chybou zaměnit metodu ELISA s metodou sondování a následného zkoumání stolice. Posledně jmenované se provádí metodami na mikroskopické úrovni, když se odebírá vzorek stolice daný pacientem, nebo se odebírá od potenciálního pacienta přímo ve zdravotnickém zařízení. Ve vzorku se snaží detekovat helmintické invaze a další komponenty, tak či onak spojené s životně důležitou aktivitou parazitů. Studují se nejen mikroskopické parazitární organismy, ale také jejich zbytky, vejce a larvy.

Interpretace testu ELISA vám nemusí poskytnout úplné pochopení problému, takže je nejlepší konzultovat lékaře nebo laboratorního asistenta. Je také chybou se domnívat, že tato metoda je relevantní, pouze pokud jsou ve střevě parazitizovány hlísty. Diagnostikováno je také mnoho dalších orgánů - paraziti mohou žít v dvanáctníku, žlučových cestách, játrech a dokonce i ve slinivce břišní.

Je pravda, že se jedná o složitější případy, takže kvalita takové analýzy bude do značné míry záviset na pracovnících laboratoře provádějících testování. Vlastnosti technologie a její odlišnost od starého laboratorního výzkumu:

• nyní, místo vzorku stolice, krev je používána určovat přítomnost helminths;
• studium vzorku probíhá v laboratoři velmi rychle, další den můžete získat kompletní informace;
• náklady na laboratorní výzkum jsou levné, protože teologie je velmi jednoduchá;
• krevní test na hlísty poskytuje vysokou míru přesnosti.

Relevance a hodnověrnost výsledků zkoušek je přímo úměrná kvalifikaci zdravotnického personálu, technickému vybavení laboratoře a také neexistenci jakékoli nedbalosti nebo nepozornosti mezi lékaři. Avšak i ten pozorný a odpovědný laboratorní asistent bude mít obrovské potíže, pokud je parazit v těle přítomen v jeho minimální populaci, nebo pokud byla spojka provedena okamžitě v době testování.

Imunologická analýza krve pomocí ELISA

Jen málo lidí ví o tom, jaké krevní testy jsou z pohledu lidského imunologického systému, protože tyto testy nejsou tak běžné. Takový krevní test zpravidla poskytuje informace o viru imunodeficience v lidském těle a je anonymní, protože se provádí na žádost pacienta.

V zásadě je pro analýzu ELISA studovaným biologickým materiálem krev, lze však zkoumat mozkomíšní tekutinu, obsah sklivce, plodovou vodu, atd..

K odběru vzorků se používá krev odebraná z žíly na lačný žaludek, ze které se sérum získává pro výzkum odstředěním. Studie krevního séra může kromě toho odhalit řadu sexuálně přenosných nemocí (syfilis, herpes, chlamydie), jakož i všechny typy hepatitidy, spalniček, zarděnky, příušnic a toxoplazmózy.

V zásadě je pro analýzu ELISA studovaným biologickým materiálem krev, lze však zkoumat mozkomíšní tekutinu, obsah sklivce, plodovou vodu, atd..

Imunoglobuliny jsou imunitní molekuly, které se mohou vázat a neutralizovat na většinu infekčních patogenů a toxinů v těle. V tomto případě je nejdůležitější charakteristikou imunoglobulinů jejich specificita, to znamená schopnost vázat se ke specifickému antigenu. Právě tato vlastnost se používá k provedení krevního testu na imunoglobulin.

Existuje pět typů imunoglobulinů, ale nejvíce studovanými jsou imunoglobuliny A, M a G. Imunoglobuliny M a G jsou aktivní v krvi. Imunoglobuliny A jsou druhem bariéry na povrchu sliznic, protože jsou přítomny ve velkém množství.

Imunologický krevní test vám umožňuje určit typ imunoglobulinů, díky tomu ELISA umožňuje nejen diagnostikovat onemocnění, ale také určit jeho stádium a sledovat dynamiku onemocnění:

• v prvních 2 týdnech nemoci byly nalezeny pouze imunoglobuliny A;
• od 2. do 3. týdne nemoci se v krvi nacházejí imunoglobuliny A a M;
• CC3 po dobu 4 týdnů, krevní test na imunoglobulin je stanoven všemi třemi typy;
• během zotavení imunoglobuliny M v krvi zmizí a množství A a G se sníží 2 až 4krát;
• v přítomnosti chronického procesu jsou imunoglobuliny G nezbytně přítomny v krvi, imunoglobuliny M chybí, imunoglobuliny A mohou být přítomny nebo chybí.

Rozsah imunologického krevního testu pomocí ELISA

• Diagnostika virových onemocnění: hepatitida, herpes, virus Epstein-Barrové, cytomegalovirus atd.
• pohlavně přenosné infekce: chlamydie, kapavka, Trichomonas, mykoplazma, ureaplasma;
• syfilis; endokrinologie (stanovení hladin hormonů);
• nádorové markery (diagnostika onkologických chorob); imunologie (diagnostika imunodeficience);
• alergologie (diagnostika a léčba alergií).

Sérologický krevní test je laboratorní krevní testovací metoda, která se používá k diagnostice infekčních chorob a stanovení stadia infekčního procesu. Sérologická odpověď je založena na interakci protilátek a antigenů.

Stanovení antigenů se používá ke stanovení rodu a druhu mikroorganismů. Tato výzkumná metoda se používá v urologii a venereologii. Krev pro sérologický krevní test se odebere ráno na lačný žaludek z žíly.

Indikace ke jmenování a detekci nemocí metodou ELISA

Hlavním biomateriálem pro ELISA je krevní sérum: v laboratoři je pacientovi odebrán vzorek krve z žíly, ze které jsou dále odstraněny tvarové prvky, které komplikují analýzu. V některých jiných případech se pro analýzu používá mozkomíšní mok, plodová voda, nátěry sliznic atd.

Aby nedocházelo ke zkreslení výsledků, doporučuje se darovat krev na lačný žaludek a dva týdny před studií (pokud je cílem diagnostikovat chronická, latentní infekční onemocnění) je nutné přestat brát antibiotika a antivirová léčiva. Není možné pokrýt úplný seznam indikací pro ELISA.

Nejběžnější cíle analýzy jsou:

• diagnostika akutních a chronických infekčních chorob: IgM a IgG proti virovým hepatitidám A, B, C, E a také proti antigenům hepatitidy B a C; IgG proti HIV; Ig M a IgG na cytomegalovirovou infekci; Ig M a IgG proti viru Epstein-Barrové; Ig M a IgG proti herpetickým infekcím; Ig M a IgG proti toxoplazmóze;
• Ig M a IgG proti spalničkám, zarděnkám, salmonelóze, úplavici, klíšťové encefalitidě a dalším chorobám; IgG proti parazitárním chorobám; Ig M a IgG proti pohlavně přenosným infekcím; Infekce IgG na Helicobacter pylori. Obecné hodnocení indikátorů lidské imunity a markerů některých autoimunitních onemocnění. Identifikace onkologických markerů (faktor nádorové nekrózy, antigen specifický pro prostatu, nádorový embryonální antigen a další). Stanovení obsahu hormonů v krevním séru (progesteron, prolaktin, testosteron, hormon stimulující štítnou žlázu a další).

Výhody metody ELISA

Nespornými výhodami testu ELISA jsou vysoká citlivost a specifičnost metody. Citlivost je schopnost rozpoznávat cílovou látku, i když je její koncentrace ve vzorku nízká. Specifičnost na druhé straně znamená přesnost diagnózy: pokud je výsledek pozitivní, znamená to, že přesně byla nalezena protilátka nebo antigen, který byl předpokládán, a ne některé další.

ELISA do značné míry nahradila „zlatý standard“mikrobiologie - bakteriologickou diagnostickou metodu, během níž bylo nutné identifikovat patogen, izolovat ho od těla a poté kultivovat kulturu na živném médiu v zkumavce po dobu několika dnů.

Po celou dobu, kdy byla analýza prováděna, byli lékaři nuceni léčit pacienta „slepě“a hádat o původu mikroorganismu podle symptomů nemoci. Stanovení IgM pomocí ELISA vám umožní stanovit přesnou diagnózu již v prvních dnech onemocnění.

Vysoký stupeň zpracovatelnosti enzymového imunotestu minimalizuje vliv lidského faktoru, což snižuje pravděpodobnost chyby. Většina testovacích souprav a činidel ELISA používaných v moderních laboratořích je vyráběna v průmyslovém prostředí, což zaručuje přesný výsledek.

Nevýhody metody ELISA

Bohužel, k provedení testu ELISA potřebujete vědět, co přesně hledat: technika analýzy znamená, že lékař má předem předpoklad o povaze onemocnění. Proto nemá smysl předepisovat takový test v naději, že náhodně "uhodneme" diagnózu.

V případě diagnostiky infekčních onemocnění nemůže enzymatický imunotest nalézt patogen a určit jeho specifické vlastnosti: pouze indikuje přítomnost protilátek v krvi pacienta, nepřímo naznačuje přítomnost cizího mikroorganismu v lidském těle. ELISA je extrémně přesná, ale ne levná metoda, takže ji musíte používat rozumně a výsledky by měl interpretovat kvalifikovaný lékař.

Možné výsledky ELISA

V závislosti na obsahu analýzy může forma představovat data ve formě tabulky se seznamem všech protilátek nebo antigenů s poznámkami o negativní nebo pozitivní reakci, nebo bude uvedena kvantitativní hodnota výsledku (negativní, slabě pozitivní, pozitivní nebo ostře pozitivní).

Druhá možnost určuje, kolik protilátek je obsaženo v analyzovaném vzorku. Dalším kvantitativním ukazatelem je index avidity protilátek, vyjádřený v procentech. Ukazuje, kolik času uplynulo od začátku infekčního procesu (čím vyšší je index, tím více).

Dnes se vyrábí tisíce typů testovacích systémů ELISA, které umožňují detekci specifických protilátek a antigenů v celé řadě patologií. Proto je tato analýza používána téměř ve všech lékařských odvětvích. Diagnóza provedená pomocí ELISA je zárukou jmenování adekvátní terapie a účinné léčby nemoci.

Pokud máte potřebná činidla a dobrou organizaci laboratoře, obdržíte výsledek testu do 1–2 dnů po odběru krve. V některých případech, pokud je vyžadována reakce na mimořádné situace, může být tato doba zkrácena na 2-3 hodiny.

Výsledkem vysoce kvalitního testu ELISA bude jednoznačný verdikt: požadovaná látka je ve vzorku buď nalezena, nebo nenalezena. Pokud mluvíme o kvantitativní analýze, pak lze koncentraci vyjádřit jako číselnou hodnotu nebo určitý počet znaménků „+“(od jednoho do několika).

Zjistit více:

• Protilátkový krevní test: diagnostika imunitního systému
• Imunoassay krevní test v parazitologii