Imunoassay Krevní Test V Parazitologii

2023 Autor: Riley Dean | [email protected]. Naposledy změněno: 2023-05-24 12:07

Enzymaticky vázaný imunosorbentní test se provádí, pokud se vyskytnou obtíže s diagnostikou, má-li pacient dědičnou predispozici k určitým chorobám, aby se vyhodnotila účinnost léčby. ELISA je moderní laboratorní test, který pomáhá určit konkrétní protilátky v krvi u některých chorob. Metoda je vysoce specifická a citlivá.

Obsah článku:

• 1 Imunoassay
• 2 Základní pojmy a princip metody enzymové imunoanalýzy

• 3 Různé třídy protilátek IgG, IgM, IgA

  • 3.1 IgM protilátky
  • 3.2 IgG protilátky
  • 3,3 IgA protilátky
• 4 Výhody metody
• 5 Nevýhody metody
• 6 Indikace pro jmenování a zjistitelné nemoci
• 7 Analyzovaný biomateriál a vlastnosti jeho sbírky
• 8 Načasování připravenosti výsledků ELISA
• 9 Interpretace enzymového imunotestu
• 10 možných výsledků ELISA
• 11 Na závěr

Propojený imunosorbentový test

Analýza odhaluje antigeny charakteristické pro určité patogeny a protilátky proti nim. Enzymaticky vázaný imunosorbentový test je založen na reakci interakce antigenu se specifickou protilátkou, v důsledku čehož se vytvoří komplex, který obsahuje speciální značku, která mění barvu vzorku působením činidla.

Intenzita obarvení umožňuje posoudit přítomnost protilátek nebo antigenů charakteristických pro konkrétní infekci a již pomocí zařízení se stanoví jejich množství. Antigeny jsou cizí látky, které způsobují imunitní obrannou reakci v těle - produkují se specifické proteiny (imunoglobuliny).

Každý patogen má vlastní sadu antigenů a imunitní odpověď na ně je také specifická. Hlavním materiálem pro analýzu je krev z žíly.

Enzymaticky vázaný imunosorbentový test umožňuje identifikovat latentní onemocnění s vysokou přesností v rané fázi, informovat lékaře o obecném stavu pacienta a o rizicích rozvoje patologií, o stavu reprodukčního zdraví.

Provádí se analýza k diagnostice virových onemocnění: herpes, hepatitidy, cytomegaloviru, viru Epstein-Barrové atd., Pohlavně přenosných infekcí: kapavka, ureaplasma, chlamydóza, mykoplazma, Trichomonas, syfilis, stanovení hormonálních hladin, diagnostika rakoviny a imunodeficience, detekce a léčba alergií. Pro analýzu můžete kromě krve vzít také mozkomíšní mok, plodovou vodu a obsah sklovitého těla.

Analýza předpokládá použití skupiny testů ELI:

• Test ELI-B, který umožňuje učinit závěr o stavu imunitního systému;
• ELI-Dia-test, který určuje stav endokrinního systému. S jeho pomocí je diagnostikován diabetes prvního a druhého typu;
• ELI-N-Complex-12, který informuje o stavu periferního a centrálního nervového systému;
• ELI-Ankor-test-12, analýza, která hodnotí stav srdce a krevních cév, hodnotí riziko vzniku mozkové mrtvice, infarktu;
• ELI-Viscero-16 se provádí za účelem posouzení celkového stavu pacienta. Tento test poskytuje diagnostiku 16 indikátorů: střeva, nervový systém, myokard, ledviny, imunitní systém, játra, žaludek atd.;
• ELI-P-complex-12 je určen k posouzení reprodukční kapacity těla;
• ELI-GIT-12 - analýza, která hodnotí stav gastrointestinálního traktu a umožňuje předvídat riziko rozvoje patologií;
• Test ELI-HCG-APS odhaluje poruchy reprodukčního zdraví.

Základní pojmy a princip metody enzymové imunoanalýzy

Enzymaticky vázaný imunosorbentový test (ELISA) je laboratorní diagnostická metoda založená na reakci „antigen-protilátka“, která umožňuje detekci proteinových látek (včetně enzymů, virů, bakteriálních fragmentů a dalších složek biologických tekutin). Abychom pochopili, jak enzymový imunotest funguje, pokusme se pochopit podstatu reakce „antigen-protilátka“. Antigen je molekula cizí tělu, obvykle proteinového původu, která může vstoupit do lidského těla spolu s infekčním agens.

Částice krve někoho jiného (pokud se neshoduje s naší skupinou) jsou také antigeny. V těle jsou antigeny schopné vyvolat imunitní odpověď zaměřenou na ochranu integrity vnitřního prostředí před cizími látkami. Proto naše tělo syntetizuje speciální látky - protilátky (imunoglobuliny), schopné se spojit s antigeny podle principu „key to lock“, který je váže na imunitní komplex (tento proces se nazývá reakce „antigen-protilátka“).

Propojený imunosorbentový test. Tyto imunitní komplexy jsou imunitními buňkami snadněji rozpoznávány a ničeny. Existuje několik typů protilátek, z nichž každá vstupuje do činnosti ve specifické fázi imunitní odpovědi. Imunoglobuliny třídy M (IgM) jsou tedy syntetizovány jako první v reakci na proniknutí antigenu do těla.

Obsah těchto protilátek je nejvyšší v prvních dnech infekčního procesu. Po nich imunitní systém uvolňuje do krve imunoglobuliny třídy G (IgG) třídy G, které pomáhají ničit antigeny, dokud není infekce úplně poražena, a v budoucnu také cirkulují skrz cévy, čímž poskytuje imunitu proti opětovné infekci.

Očkování je založeno na tomto jevu: díky očkování obsahujícím oslabené antigeny mikrobů a virů se v naší krvi objevuje velké množství IgG, které při kontaktu se skutečnou hrozbou rychle potlačí infekci - dříve, než poškodí zdraví. Existují také imunoglobuliny třídy A (vyskytují se ve velkém množství ve sliznicích, chránící „přístupy“k tělu), E (bojují proti parazitárním infekcím) a další.

V laboratorní diagnostice jsou předmětem zájmu nejčastěji IgM, IgG a IgA: jejich koncentrací je možné posoudit, v jaké fázi je infekční proces, a také zjistit, zda osoba někdy trpěla určitým onemocněním (například zarděnkami nebo planými neštovicemi). Jak víte, které antigeny nebo protilátky jsou přítomny v lidském těle? Pokud lékař má podezření, že určitá infekce je příčinou onemocnění, nebo chce měřit koncentraci určitého hormonu, předepíše pacientovi enzymový imunotest.

Reakce "antigen-protilátka" může být reprodukována v laboratorních podmínkách: použijte připravené protilátky nebo antigeny k určení, zda je odpovídající sloučenina přítomna ve studovaném vzorku. Nejprve musíte získat vzorek biologické tekutiny - obvykle krevního séra. Laboratoř používá plastové destičky s jamkami, které již obsahují čištěné antigeny podezřelého patogenu (nebo protilátky, pokud je úkolem hledat antigen).

Vzorky se umístí do jamek, kde se vytvoří imunitní komplexy - či nikoli. Pokud došlo k „setkání“, určité barvivo vstoupí do enzymatické reakce s kombinovanou molekulou, což umožňuje vyvodit závěr o výsledcích analýzy pomocí instrumentálního posouzení optické hustoty.

ELISA je kvalitativní a kvantitativní. V prvním případě se předpokládá jednoznačná odpověď: požadovaná látka je ve vzorku buď nalezena, nebo nenalezena.

V případě kvantitativní analýzy umožňuje složitější řetězec reakcí posoudit koncentraci protilátek v lidské krvi, která ve srovnání s výsledky předchozích testů odpoví na otázku, jak se infekční proces vyvíjí. Je zajímavé, že prekurzorem enzymatického imunotestu byl radioimunoanalýzou, která k identifikaci úspěšné reakce použila značené protilátky a antigeny. Protože provádění takové diagnostiky představovalo potenciální ohrožení zdraví laboratorního personálu, začali vědci hledat bezpečnou alternativu k „zabarvení“vzorků. Takže v roce 1971 byla vynalezena IFA.

Různé třídy protilátek IgG, IgM, IgA

Enzymaticky vázaný imunosorbentový test detekuje protilátky proti infekcím patřícím do různých tříd Ig (G, A, M). Protilátky proti viru jsou v přítomnosti infekce stanovovány ve velmi rané fázi, což zajišťuje účinnou diagnostiku a kontrolu průběhu nemocí. Nejběžnější metody diagnostiky infekcí jsou testy na protilátky IgM (akutní fáze infekce) a protilátky IgG (rezistentní na infekci). Tyto protilátky jsou určeny pro většinu infekcí.

Jeden z nejčastějších testů - nemocniční screening (testy na HIV, syfilis a hepatitidu B a C) však nerozlišuje typ protilátek, protože přítomnost protilátek proti virům těchto infekcí automaticky naznačuje chronický průběh choroby a je kontraindikací například pro závažné chirurgické zákroky. Proto je důležité diagnózu vyvrátit nebo potvrdit.

Propojený imunosorbentový test. Podrobná diagnóza typu a množství protilátek u diagnostikovaného onemocnění může být provedena průchodem analýzy pro každou konkrétní infekci a typ protilátek. Primární infekce je detekována, když je ve vzorku krve detekována diagnosticky významná hladina protilátek IgM nebo je-li signifikantně zvýšen počet protilátek IgA nebo IgG v párovém séru odebraném v intervalu 1-4 týdnů.

Reinfekce nebo reinfekce je detekována rychlým zvýšením hladin protilátek IgA nebo IgG. IgA protilátky jsou vyšší u starších pacientů a přesněji diagnostikují současnou infekci u dospělých.

Infekce v krvi v minulosti je definována jako zvýšení protilátek IgG bez zvýšení jejich koncentrace ve spárovaných vzorcích odebraných v intervalu 2 týdnů. Současně neexistují žádné protilátky tříd IgM a A.

IgM protilátky

Jejich koncentrace stoupá brzy po nemoci. IgM protilátky jsou detekovány již po 5 dnech od počátku a dosahují vrcholu v intervalu od jednoho do čtyř týdnů, poté klesají na diagnosticky nevýznamné hladiny během několika měsíců, dokonce i bez léčby. Pro úplnou diagnózu však nestačí pouze stanovit protilátky třídy M: nepřítomnost této třídy protilátek neznamená nepřítomnost onemocnění. Neexistuje žádná akutní forma onemocnění, ale může být chronická.

Protilátky IgM mají velký význam v diagnostice hepatitidy A a dětských infekcí (zarděnky, černého kašle, planých neštovic), snadno se přenášejí vzduchovými kapičkami, protože je důležité tuto nemoc identifikovat co nejdříve a izolovat nemocného.

IgG protilátky

Hlavní úlohou protilátek IgG je dlouhodobá ochrana těla proti většině bakterií a virů - ačkoli k jejich produkci dochází pomaleji, reakce na antigenní podnět zůstává stabilnější než reakce protilátek třídy IgM.

Propojený imunosorbentový test. Hladiny IgG protilátek rostou pomaleji (15-20 dní po nástupu onemocnění) než IgM, ale zůstávají zvýšené po delší dobu, a proto mohou vykazovat dlouhodobou infekci v nepřítomnosti IgM protilátek. Hladiny IgG mohou být nízké po mnoho let, ale při opakované expozici stejnému antigenu se hladiny protilátek IgG rychle zvyšují.

Pro kompletní diagnostický obraz je nutné stanovit protilátky IgA a IgG současně. Pokud není výsledek IgA nejasný, potvrďte stanovení IgM. V případě pozitivního výsledku a přesné diagnózy by měl být paralelně zkontrolován druhý test provedený 8-14 dní po prvním, aby se stanovilo zvýšení koncentrace IgG. Výsledky analýzy by měly být interpretovány ve spojení s informacemi získanými v jiných diagnostických postupech.

K diagnostice Helicobacter pylori, jedné z příčin vředů a gastritidy, se používají zejména protilátky IgG.

IgA protilátky

Vyskytují se v séru 10-14 dní po nástupu nemoci a zpočátku se dokonce nacházejí v semenných a vaginálních tekutinách. Hladiny IgA protilátek obvykle klesnou o 2-4 měsíce po infekci, pokud je léčba úspěšná. Po reinfekci opět stoupá hladina protilátek IgA. Pokud hladina IgA po léčbě neklesne, je to příznak chronické formy infekce.

Výhody metody

Nespornými výhodami testu ELISA jsou vysoká citlivost a specifičnost metody. Citlivost je schopnost rozpoznávat cílovou látku, i když je její koncentrace ve vzorku nízká. Specifičnost na druhé straně znamená přesnost diagnózy: pokud je výsledek pozitivní, znamená to, že přesně byla nalezena protilátka nebo antigen, který byl předpokládán, a ne některé další.

Enzymaticky vázaný imunosorbentový test do značné míry nahradil „zlatý standard“mikrobiologie - bakteriologickou diagnostickou metodu, během níž bylo nutné identifikovat patogen, aby byl izolován od těla, a poté kultivovat kulturu na živném médiu v zkumavce několik dní. Po celou dobu, kdy byla analýza prováděna, byli lékaři nuceni léčit pacienta „slepě“a hádat o původu mikroorganismu podle symptomů nemoci.

Stanovení IgM pomocí ELISA vám umožní stanovit přesnou diagnózu již v prvních dnech onemocnění. Vysoký stupeň zpracovatelnosti enzymového imunotestu minimalizuje vliv lidského faktoru, což snižuje pravděpodobnost chyby. Většina testovacích souprav a činidel ELISA používaných v moderních laboratořích je vyráběna v průmyslovém prostředí, což zaručuje přesný výsledek.

Nevýhody metody

Bohužel, k provedení testu ELISA potřebujete vědět, co přesně hledat: technika analýzy znamená, že lékař má předem předpoklad o povaze onemocnění. Proto nemá smysl předepisovat takový test v naději, že náhodně "uhodneme" diagnózu. V případě diagnostiky infekčních onemocnění nemůže enzymatický imunotest nalézt patogen a určit jeho specifické vlastnosti: pouze indikuje přítomnost protilátek v krvi pacienta, nepřímo naznačuje přítomnost cizího mikroorganismu v lidském těle.

ELISA je extrémně přesná, ale ne levná metoda, takže ji musíte používat rozumně a výsledky by měl interpretovat kvalifikovaný lékař.

Indikace pro jmenování a zjištěné nemoci

Není možné pokrýt úplný seznam indikací pro ELISA. Nejběžnější účely analýzy jsou: Diagnostika akutních a chronických infekčních chorob:

• IgM a IgG proti virovým virům hepatitidy A, B, C, E a hepatitidy B a C;
• IgG proti HIV; Ig M a IgG na cytomegalovirovou infekci;
• Ig M a IgG proti viru Epstein-Barrové; Ig M a IgG proti herpetickým infekcím;
• Ig M a IgG proti toxoplazmóze;
• Ig M a IgG proti spalničkám, zarděnkám, salmonelóze, úplavici, klíšťové encefalitidě a dalším chorobám;
• IgG proti parazitárním chorobám;
• Ig M a IgG proti pohlavně přenosným infekcím;
• Infekce IgG na Helicobacter pylori.

Obecné hodnocení indikátorů lidské imunity a markerů některých autoimunitních onemocnění. Identifikace onkologických markerů (faktor nádorové nekrózy, antigen specifický pro prostatu, nádorový embryonální antigen a další). Stanovení obsahu hormonů v krevním séru (progesteron, prolaktin, testosteron, hormon stimulující štítnou žlázu a další).

Analyzovaný biomateriál a vlastnosti jeho sbírky

Hlavním biomateriálem pro ELISA je krevní sérum: v laboratoři je pacientovi odebrán vzorek krve z žíly, ze které jsou dále odstraněny tvarové prvky, které komplikují analýzu. V některých jiných případech se pro analýzu používá mozkomíšní mok, plodová voda, nátěry sliznic atd.

Aby se předešlo zkreslení výsledků, doporučuje se darovat krev na lačný žaludek a dva týdny před studií (pokud je cílem diagnostikovat chronická, latentní infekční onemocnění) je nutné přestat brát antibiotika a antivirová léčiva. Podmínky připravenosti výsledků testu ELISA Pokud máte potřebná činidla a dobrou organizaci laboratoře, obdržíte výsledek testu do 1–2 dnů po odběru krve. V některých případech, pokud je vyžadována reakce na mimořádné situace, může být tato doba zkrácena na 2-3 hodiny.

Výsledky IFA jsou připraveny

Pokud máte potřebná činidla a dobrou organizaci laboratoře, obdržíte výsledek testu do 1–2 dnů po odběru krve. V některých případech, pokud je vyžadována reakce na mimořádné situace, může být tato doba zkrácena na 2-3 hodiny.

Dekódování enzymového imunotestu

Výsledkem vysoce kvalitního testu ELISA bude jednoznačný verdikt: požadovaná látka je ve vzorku buď nalezena, nebo nenalezena. Pokud mluvíme o kvantitativní analýze, pak lze koncentraci vyjádřit jako číselnou hodnotu nebo určitý počet znaménků „+“(od jednoho do několika).

Analyzované ukazatele:

• IgM - přítomnost této třídy imunoglobulinů naznačuje akutní infekční proces v těle. Nepřítomnost IgM může naznačovat jak nepřítomnost specifického patogenu v těle, tak přechod infekce do chronického stádia.
• IgA s negativním IgM testem nejčastěji indikuje chronickou nebo latentní infekci. IgM a IgA (přítomnost kloubů) - dva pozitivní výsledky ukazují na výšku akutní fáze onemocnění.
• IgG hovoří o chroničnosti onemocnění nebo o zotavení a vývoji imunity vůči infekčnímu agens.

Možné výsledky ELISA

V závislosti na obsahu analýzy může forma představovat data ve formě tabulky se seznamem všech protilátek nebo antigenů s poznámkami o negativní nebo pozitivní reakci, nebo bude uvedena kvantitativní hodnota výsledku (negativní, slabě pozitivní, pozitivní nebo ostře pozitivní). Druhá možnost určuje, kolik protilátek je obsaženo v analyzovaném vzorku. Dalším kvantitativním ukazatelem je index avidity protilátek, vyjádřený v procentech.

Ukazuje, kolik času uplynulo od začátku infekčního procesu (čím vyšší je index, tím více).

Dnes se vyrábí tisíce typů testovacích systémů ELISA, které umožňují detekci specifických protilátek a antigenů v celé řadě patologií.

Proto je tato analýza používána téměř ve všech lékařských odvětvích. Diagnóza provedená pomocí ELISA je zárukou jmenování adekvátní terapie a účinné léčby nemoci.

Konečně

Někdy, po detekci IgG protilátek ve výsledcích testů, například toxoplazmózy nebo oparu, pacienti panikaří, aniž by se podívali na skutečnost, že IgM protilátky, které naznačují přítomnost současné infekce, nemusí být vůbec přítomny. V tomto případě analýza hovoří o předchozí infekci, vůči níž se vyvinula imunita.

V každém případě je lepší svěřit interpretaci výsledků analýzy lékaři a v případě potřeby s ním určit léčebnou taktiku.

Zjistit více:

• Analýza pro skupinu: co to je, příprava a chování
• Analýza stolice pro úplavici: jak brát, termíny a metody
• Analýza pro toxoplasmózu: proč a jak to správně napravit